無菌室浮游菌測試操作規(guī)程

1? 范圍：

? ??本標(biāo)準規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)無菌室和潔凈區(qū)中浮游菌的測試條件和測試方法。

? ??本標(biāo)準適用于醫(yī)藥工業(yè)無菌室和潔凈區(qū)，無菌室或局部空氣凈化區(qū)域（包括潔凈工作臺）的浮游菌的測試和環(huán)境的驗證。

2? 引用標(biāo)準：GB/T 16293.2010

??? 藥品生產(chǎn)管理規(guī)范（1998修訂）附錄。

3? 標(biāo)準

4? 測試方法

4.1? 方法提要

本標(biāo)本采用的方法是計數(shù)濃度法。即通過收集懸游在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時間和適宜的生長條件下讓其繁殖到可見菌落計數(shù)，以判定該潔室的微生物濃度。

4.2人員的職責(zé)及培訓(xùn)

無菌室的測試人員應(yīng)進行本專業(yè)的培訓(xùn)并獲得相應(yīng)的資格后才能才能履行對無菌室測試的職責(zé)，其中包含涉及的衛(wèi)生知識和基本的微生物知識。

無菌室的測試人員應(yīng)選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級別要求相適應(yīng)的穿戴方式，外面的衣服不能帶進100000級以上的區(qū)域。

4.3? 儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基

選擇合適的浮游菌采樣器，包括采用無油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養(yǎng)基表面的水分布被吹干。

本測試需要具備儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基如下：

a) 浮游菌采樣器；

b) 培養(yǎng)皿；

c) 高壓消毒鍋；

d) 培養(yǎng)基；

e) 恒溫培養(yǎng)箱；??

4.4? 浮游菌采樣器原理

浮游菌采樣器一般采用撞擊法機理，可分為夾縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。夾縫式采樣器由內(nèi)部風(fēng)機將氣流吸入，通過采樣器的夾縫式平板，將采集空氣噴射并撞擊到緩慢的平板培養(yǎng)基表面，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從才樣器的前部進入后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物粒子有足夠的時間撞擊到專用的固型培養(yǎng)條上，附著活的微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過一個金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經(jīng)過機械加工的特制小孔，通過風(fēng)機將收集到的細小的空氣直接撞擊到平板培養(yǎng)基表面，附著的活物微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)成型后形成菌落。

4.5? 測試要點

4.5.1? 必須按照儀器的檢定周期，定期對測試儀器作檢定。應(yīng)使用檢定合格，并且使用有效期內(nèi)的儀器。

4.5.2? 測試儀器未進入被測區(qū)域時，若必需，則先清洗表面吧，或在相應(yīng)的無菌室內(nèi)準備和存放（用保護罩或其他適當(dāng)?shù)赝庹直Ｗo儀器）。

4.5.3? 在100級無菌室內(nèi)用紙時，上面應(yīng)蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級的無菌室內(nèi)不能用鉛筆的橡皮。

4.5.4? 使用測試儀器時應(yīng)嚴格按照說明書操作。

4.5.4.1? 儀器開機，預(yù)熱到穩(wěn)定后，方可按說明書的規(guī)定對儀器進行校正，同時檢查采樣流量，并根據(jù)采樣量設(shè)定時間。

4.5.4.2?? 采樣口必須用使用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。

4.5.4.3? 采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。

4.5.4.4?? 采樣管的長度應(yīng)根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲。

4.6?? 培養(yǎng)皿

4.6.1? 一般采用φ90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿?？筛鶕?jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。

4.6.2離心式采樣器采用專用的固型培養(yǎng)條

4.7? 培養(yǎng)基

???? 大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或其他用戶認可并經(jīng)驗證的培養(yǎng)基。

4.8 恒溫培養(yǎng)箱

??? 必須定期對恒溫培養(yǎng)箱進行效驗

4.9? 測試步驟；

4.9.1? 測試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴格消毒。

4.9.1.1? 采樣器進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級無菌室的采樣器

宜預(yù)先放在被測房間內(nèi)。

4.9.1.2? 用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

4.9.1.3? 采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。

4.9.1.4? 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對采樣管的外壁及內(nèi)壁進行消毒時，應(yīng)將管中的殘留液倒掉并晾干。

4.9.1.5? 采樣者應(yīng)穿戴與被測潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或帶無菌手套操作。

4.9.1.6 采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于5min，并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定時間。

4.9.1.7 關(guān)閉浮游采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。

4.9.1.8 置采樣口于采樣點后，開啟浮游菌采樣器進行采樣。

4.10? 培養(yǎng)

4.10.1? 全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4.10.2? 采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)經(jīng)采樣后，在30℃～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不得少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基(SDA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5d。

4.10.3每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

4.11? 菌落計數(shù)

4.11.1? 用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標(biāo)記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

4.11.2? 若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辯時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。

4.12? 注意事項

4.12.1 使用前應(yīng)仔細檢查每個培養(yǎng)皿質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能用使用的。

4.12.2 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細記錄。

4.12.3 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿面或真面仔細觀察，不要有遺漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須要菌菌落或培養(yǎng)基沉淀的物區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。

5? 測試規(guī)則

5.1 測試條件

在測試之前要，要對無菌室相關(guān)參數(shù)進行預(yù)先測試，這類測試將會提供測試懸浮粒子的環(huán)境條件，例如：這種預(yù)先測試或可包括：

a)? 溫度和相對濕度的測試。? 無菌室的溫度和相對濕度應(yīng)與其生產(chǎn)及工藝要求相適

應(yīng)（無特殊要求時，溫度控制在18℃～26℃，相對濕度控制在45%～65%之間為宜）。同時滿

足測試儀器的使用范圍；

b)? 室內(nèi)送風(fēng)量或風(fēng)速的測試的測試，或壓差的測試；

c)? 高效過濾器的泄漏測試

5.2? 測試狀態(tài)

??? 靜態(tài)和動態(tài)兩種狀態(tài)均可進行測試。

靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于2人

浮游菌測試前,被測定無菌室(區(qū))由用戶決定是否需要預(yù)先消毒.

??? 浮游菌測試時應(yīng)標(biāo)明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)。

5.3? 測試時間

5.3.1? 在空態(tài)或靜態(tài)a測試時，對單向流無菌室而言，測試宜在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10min后開始。對非單向流無菌室，測試宜在凈化系統(tǒng)正常運行時間不少于30min后開始。在靜態(tài)b測試時，對單向流潔凈是（區(qū)），測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10min自凈后開始；；對非單向無菌室，測試宜在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20min自凈后開始。

5.3.2? 在動態(tài)測試時，則須記錄生產(chǎn)開始的時間以及測試時間。

5.4.浮游菌濃度的計算