?

1??????????目的

建立無菌室浮游菌測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)操作程序，規(guī)范無菌室浮游菌的檢測(cè)。

2??????????范圍

適用于無菌室（包括潔凈工作臺(tái)）浮游菌的測(cè)試和環(huán)境驗(yàn)證。

3??????????職責(zé)

QA、QC人員遵照?qǐng)?zhí)行。

4??????????內(nèi)容

4.1????參考標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 16293-2010

4.2????測(cè)試方法

本測(cè)試方法為計(jì)數(shù)濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長條件讓其繁殖到可見的菌落計(jì)數(shù)，以判定該無菌室的微生物濃度。

4.3????測(cè)試儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基

浮游菌采樣器、培養(yǎng)皿（選用與儀器相適應(yīng)的培養(yǎng)皿）、培養(yǎng)基、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器。

4.4????測(cè)試狀態(tài)及測(cè)試時(shí)間

4.4.1???靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種狀態(tài)均可進(jìn)行測(cè)試，靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于2人。

4.4.2???在靜態(tài)a測(cè)試時(shí)，單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行時(shí)間不少于10分鐘后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘后開始。在靜態(tài)b測(cè)試時(shí)，單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流無菌室（區(qū)），測(cè)試在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過20分鐘自凈后開始。

4.5????采樣點(diǎn)的確定

4.5.1???最少采樣點(diǎn)數(shù)目見表1，每次最小采樣量見表2。

表1?最少采樣點(diǎn)數(shù)目

?

表2?最小采樣量

?

4.5.2???采樣點(diǎn)位置布置宜力求均勻，避免采樣點(diǎn)在局部區(qū)域過于稀疏，采樣點(diǎn)按照《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》附件×××車間潔凈度監(jiān)測(cè)采樣點(diǎn)布局圖的要求布置，每個(gè)采樣點(diǎn)一般采樣一次。

4.5.3???工作區(qū)采樣點(diǎn)位置離地0.8m~1.5m左右（略高于工作面），送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置離開送風(fēng)面30cm左右，可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加測(cè)點(diǎn)。

4.6????測(cè)試準(zhǔn)備

4.6.1???采樣器在進(jìn)入被測(cè)區(qū)域前先清潔表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被測(cè)區(qū)域內(nèi)，與被測(cè)試區(qū)域一起消毒（用于A級(jí)無菌室的采樣器必須預(yù)先放在被測(cè)房間內(nèi)）。

4.6.2???A/B級(jí)區(qū)采用一次性培養(yǎng)皿，其它區(qū)域按無菌操作要求，在中檢室潔凈工作臺(tái)上提前制備培養(yǎng)備用（將滅菌后的培養(yǎng)基用水浴溶解，冷卻至約50-60℃，Φ90mm培養(yǎng)皿每個(gè)傾注約20ml培養(yǎng)基，Φ150mm培每個(gè)傾注約30ml培養(yǎng)基），培養(yǎng)皿加蓋后在室溫下放至凝固。自制好的培養(yǎng)皿在無菌室內(nèi)存放不超過48小時(shí)，2~8℃保存的培養(yǎng)皿一般不超過1周，一次性培養(yǎng)皿在標(biāo)注的有效期內(nèi)使用，過期不得使用。

4.6.3???A/B級(jí)區(qū)使用的培養(yǎng)皿在區(qū)域消毒前一次性傳入，隨環(huán)境一起消毒，在消毒液取用間架子上暫存，在有效期內(nèi)使用。若需臨時(shí)傳入，則必須在前一天臭氧消毒前通過C級(jí)與B級(jí)傳遞窗傳入B級(jí)區(qū)進(jìn)行臭氧消毒，第二天使用。傳入前表面也必須用75%酒精擦拭。其它區(qū)域用培養(yǎng)皿按物品傳入要求當(dāng)天傳入使用。

4.6.4???采樣前，先用75%酒精清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面（FKC型浮游空氣塵菌采樣器用酒精清洗采樣頭）。

4.6.5???測(cè)試具體操作見“JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器標(biāo)準(zhǔn)操作程序或FKC-1型浮游空氣塵菌采樣器標(biāo)準(zhǔn)操作程序”。

4.6.6???采樣結(jié)束后，蓋上培養(yǎng)皿蓋子，在培養(yǎng)皿上標(biāo)注所有信息（包括產(chǎn)品批號(hào)，放置位置等），將培養(yǎng)皿用適宜的方式捆扎，倒置于30~35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間不少于2天。

4.6.7???培養(yǎng)結(jié)束后逐個(gè)檢查培養(yǎng)皿，用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。

4.7????測(cè)試記錄應(yīng)包含以下內(nèi)容

4.7.1 ?被測(cè)試區(qū)域名稱、測(cè)試日期、測(cè)試依據(jù)、測(cè)試者姓名、測(cè)試儀器及測(cè)試方法的描述，測(cè)試時(shí)所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測(cè)試人員數(shù)，采樣點(diǎn)數(shù)目，測(cè)試次數(shù)、采樣流量，測(cè)試結(jié)果（包括所有統(tǒng)計(jì)計(jì)算資料）等。

4.7.2 ?若為動(dòng)態(tài)測(cè)試，還應(yīng)記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量，現(xiàn)場設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)情況等。

4.8????結(jié)果計(jì)算

4.8.1???用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。

4.8.2???每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度計(jì)算按下式進(jìn)行

4.9????結(jié)果評(píng)定

4.9.1???每個(gè)測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)中的界限。

4.9.2???在靜態(tài)測(cè)試時(shí)，若某測(cè)點(diǎn)的浮游菌平均菌濃度超過評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測(cè)試結(jié)果均合格才能判為符合。

4.9.3???若有超過規(guī)定者，必須及時(shí)與生產(chǎn)部門聯(lián)系，對(duì)該區(qū)域進(jìn)行消毒或其它處理，然后重新測(cè)試至合格。

4.10?日常監(jiān)控

4.10.1 ?浮游菌日常監(jiān)控設(shè)糾偏限度和警戒限度（限度范圍及取樣頻次見《潔凈區(qū)環(huán)境監(jiān)控管理規(guī)程》），以保證無菌室（區(qū)）的微生物濃度受到控制，定期檢測(cè)以檢查微生物負(fù)荷以及消毒劑的效力，并作傾向分析。靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的監(jiān)控都可以采用該方法。

4.10.2 ?對(duì)于浮游菌的取樣頻次，如果出現(xiàn)下列情況應(yīng)考慮修改，在評(píng)估以下情況后，也應(yīng)確定其他項(xiàng)目的檢測(cè)頻次

——連續(xù)超過糾偏限度和警戒限度；

——停工時(shí)間比預(yù)計(jì)延長；

——關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染存在；

——在生產(chǎn)期間，空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修；

——日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)；

——消毒規(guī)程的改變；

——引起生物污染的事故等；

——當(dāng)生產(chǎn)設(shè)備有重大維修或增加設(shè)備時(shí)；

——當(dāng)無菌室（區(qū)）結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)時(shí)。

4.11?注意事項(xiàng)

4.11.1?????JYQ-Ⅱ型浮游菌采樣器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5分鐘，檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。

4.11.2?????單向流無菌室（區(qū)）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應(yīng)正對(duì)氣流方向，非單向流無菌室（區(qū)），采樣口向上。

4.11.3?????測(cè)試時(shí)必須穿著與被測(cè)區(qū)域潔凈度級(jí)別要求相適應(yīng)并經(jīng)高壓滅菌后的無菌服。

4.11.4?????布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應(yīng)盡量避開塵粒較集中的回風(fēng)口。

4.11.5?????采樣結(jié)束，需用75%酒精噴射采樣器罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤（FKC型浮游空氣塵菌采樣器噴射采樣頭和保護(hù)蓋）。

4.11.6?????應(yīng)采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對(duì)樣本的污染。

4.11.7?????每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定3只培養(yǎng)皿作為對(duì)照培養(yǎng)；培養(yǎng)皿在用于檢測(cè)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無菌落生長。

4.11.8?????采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。

4.11.9?????由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

4.11.10??必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。

5??????????相關(guān)文件

6??????????附件

無

7??????????變更歷史